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緩沖液梯度測序膠

發(fā)布時間： 2021-12-15　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1516次

原理

在本實(shí)驗方案，測序膠底部的緩沖液濃度大于其頂部濃度，使得短寡核苷酸片段（膠底部）的遷移率相對比長寡核苷酸（頂部）的遷移率要慢一些，這洋凝膠可電泳更長的時間而不至于短核苷醆從底部走失并改善了長核苷酸鏈的分離度。

材料與儀器
DNA
TEMED SDS TBE
燒杯電泳儀
步驟

1. 按基本方案步驟1~5組裝凝膠平板夾層。

2. 在2個100 ml 燒杯中，配制緩沖液梯度凝膠溶液：50 ml 用0.5×TBE配制，25 ml 用2.5×TBE配制，在50℃以下加熱至固體*溶解，冷卻至室溫，加人20 μl TEMED和200 μl 10%SDS過硫酸氨于0.5 ×TBE / 凝膠溶液，輕輕混勻。加入10 μl TEMED及100 μl 10%過硫酸銨于2.5×TBE / 凝膠溶液中輕輕混勻。

3. 用23 ml 帶橡皮吸球的吸管，吸出12.5 ml 清亮的0.5×TBE / 凝膠溶液，接著吸出12.5 ml 2.5×TBE / 凝膠溶液，可通過輕輕擠壓橡皮吸球以引進(jìn)3~4個氣泡。

4. 緩緩平穩(wěn)地將溶液注入膠模的夾層，接著用同一吸管，加入剩余的0.5×TBE凝膠溶液。如基本方案步驟8~10，插入梳子，安裝夾子，觀察凝膠的聚合。

5. 按基本方案步驟11~33電泳及處理凝膠。

同實(shí)驗其他方法
變性凝膠電泳實(shí)驗
1. 制作每塊凝膠時，首先要用肥皂及水小心嚴(yán)格地清洗兩塊30 cm×40 cm的前后玻璃平板，用去離子水沖洗后晾干，用噴射洗瓶噴10%乙酵或異丙醇使平板濕海。 2. 然后用Kimwi
電解質(zhì)梯度測序膠
1. 按基本方案步驟1~22灌制凝膠及進(jìn)行預(yù)電泳，但上槽緩沖液為0.5×TBE，下槽為1×TBE。 2. 按基本方案步驟23~26步準(zhǔn)備樣品及加樣。 3.
含甲酰胺的測序膠
1. 按基本方案步驟1~5組裝凝膠平板夾層。 2. 按所需濃度配制甲酰胺凝膠溶液，加熱輕輕挽拌使之溶解，冷卻至30℃以下。 3. 加入0.15 ml TEMED
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